Name: Un metodo semplice e rapido per lisolamento simultaneo degli isolotti primari e delle cellule acinari pancreatiche primarie da topi (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2026-01-09T13:30:00.000+00:00
Duration: 14 min 39 s
Description: Scopri un metodo semplice per isolare contemporaneamente isole e cellule acinari pancreatiche primarie da topi. Questa tecnica facilita lo studio della comunicazione intercellulare nella patogenesi del diabete.

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<ol><li>Manrai, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Diabetes+mellitus+as+a+consequence+of+acute+severe+pancreatitis%3A+unraveling+the+mystery%5BTitle%5D)+AND+%22World+J+Diabetes%22%5BJournal%5D)">Diabetes mellitus as a consequence of acute severe pancreatitis: unraveling the mystery.</a> World J Diabetes. 14 (8), 1212-1225 (2023).</li>
<li>García-Compeán, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Post-acute+pancreatitis+diabetes%3A+a+complication+waiting+for+more+recognition+and+understanding%5BTitle%5D)+AND+%22World+J+Gastroenterol%22%5BJournal%5D)">Post-acute pancreatitis diabetes: a complication waiting for more recognition and understanding.</a> World J Gastroenterol. 29 (28), 4405-4415 (2023).</li>
<li>Shen, H. N., Yang, C. C., Chang, Y. H., Lu, C. L., Li, C. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Risk+of+diabetes+mellitus+after+first-attack+acute+pancreatitis%3A+a+national+population-based+study%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Gastroenterol%22%5BJournal%5D)">Risk of diabetes mellitus after first-attack acute pancreatitis: a national population-based study.</a> Am J Gastroenterol. 110 (12), 1698-1706 (2015).</li>
<li>Hohmeier, H. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isolation+of+INS-1-derived+cell+lines+with+robust+ATP-sensitive+K%E2%81%BA+channel-dependent+and+-independent+glucose-stimulated+insulin+secretion%5BTitle%5D)+AND+%22Diabetes%22%5BJournal%5D)">Isolation of INS-1-derived cell lines with robust ATP-sensitive K⁺ channel-dependent and -independent glucose-stimulated insulin secretion.</a> Diabetes. 49 (3), 424-430 (2000).</li>
<li>Hohmeier, H. E., Newgard, C. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cell+lines+derived+from+pancreatic+islets%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Cell+Endocrinol%22%5BJournal%5D)">Cell lines derived from pancreatic islets.</a> Mol Cell Endocrinol. 228 (1-2), 121-128 (2004).</li>
<li>Neuman, J. C., Truchan, N. A., Joseph, J. W., Kimple, M. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+method+for+mouse+pancreatic+islet+isolation+and+intracellular+cAMP+determination%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">A method for mouse pancreatic islet isolation and intracellular cAMP determination.</a> J Vis Exp. (88), e50374(2014).</li>
<li>Villarreal, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+simple+high-efficiency+protocol+for+pancreatic+islet+isolation+from+mice%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">A simple high-efficiency protocol for pancreatic islet isolation from mice.</a> J Vis Exp. (150), e57048(2019).</li>
<li>Huang, C., Gu, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effective+isolation+of+functional+islets+from+neonatal+mouse+pancreas%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Effective isolation of functional islets from neonatal mouse pancreas.</a> J Vis Exp. (119), e55160(2017).</li>
<li>Petrov, M. S., Yadav, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Global+epidemiology+and+holistic+prevention+of+pancreatitis%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Gastroenterol+Hepatol%22%5BJournal%5D)">Global epidemiology and holistic prevention of pancreatitis.</a> Nat Rev Gastroenterol Hepatol. 16 (3), 175-184 (2019).</li>
<li>Xiao, A. Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Global+incidence+and+mortality+of+pancreatic+diseases%3A+a+systematic+review%2C+meta-analysis%2C+and+meta-regression+of+population-based+cohort+studies%5BTitle%5D)+AND+%22Lancet+Gastroenterol+Hepatol%22%5BJournal%5D)">Global incidence and mortality of pancreatic diseases: a systematic review, meta-analysis, and meta-regression of population-based cohort studies.</a> Lancet Gastroenterol Hepatol. 1 (1), 45-55 (2016).</li>
<li>Sendler, M., Weiss, F. U., Golchert, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cathepsin+B-mediated+activation+of+trypsinogen+in+endocytosing+macrophages+increases+severity+of+pancreatitis+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Gastroenterology%22%5BJournal%5D)">Cathepsin B-mediated activation of trypsinogen in endocytosing macrophages increases severity of pancreatitis in mice.</a> Gastroenterology. 154 (3), 704-718.e10 (2018).</li>
<li>Modenbach, J. M., Möller, C., Asgarbeik, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Biochemical+analyses+of+cystatin-C+dimers+and+cathepsin-B+reveals+a+trypsin-driven+feedback+mechanism+in+acute+pancreatitis%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Commun%22%5BJournal%5D)">Biochemical analyses of cystatin-C dimers and cathepsin-B reveals a trypsin-driven feedback mechanism in acute pancreatitis.</a> Nat Commun. 16 (1), 1702(2025).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>0.22 & mu; Filtro M</td><td>Millex</td><td>SLGPR33RB</td><td>Filtra la soluzione preparata di P di collagenasi</td></tr><tr><td>0,25 M Cloruro di calcio (sterile)</td><td>Beyotime</td><td>ST365</td><td>Via di segnalazione dipendente dal calcio per l'attivazione della secrezione di insulina</td></tr><tr><td>1 ml di siringa</td><td>Jierui</td><td>10084692516405</td><td>Usato per la perfusione di P della collagenasi nel tessuto pancreatico.</td></tr><tr><td>Soluzione di tribromoetanolo all'1,25%</td><td>Beijing Yosida Biotechnology Co., Ltd.</td><td>JT0781</td><td>Anestesia</td></tr><tr><td>Tubo centrifuga da 1,5 mL</td><td>Eppendorf</td><td>30121589</td><td>Raccogli il soprandanzante della cella per centrifugarlo e conservarlo.</td></tr><tr><td>1x Hank' Soluzione salina bilanciata</td><td>Biosharp</td><td>BL561A</td><td>Prepara la soluzione di collagenasi P e risciacqua il tessuto pancreatico</td></tr><tr><td>Piastra di coltura cellulare a 12 pozzi</td><td>SARSTEDT</td><td>83.3921</td><td>Tenere il tessuto pancreatico e l'acinar estratto dalla coltura</td></tr><tr><td>Tubo centrifugo da 15 mL</td><td>Beijing Labgic Technology Co., Ltd.</td><td>CT-002-15A</td><td>Tenere le soluzioni durante l'esperimento</td></tr><tr><td>Placca di coltura cellulare a 24 pozzi</td><td>SARSTEDT</td><td>83.3922</td><td>Cultura degli isolotti estratti</td></tr><tr><td>40-mesh&nbsp; Setaccio</td><td>Strumenti Weidan</td><td>N/A</td><td>Filtra il tessuto pancreatico</td></tr><tr><td>Pipetta Pasteur da 5 mL</td><td>Biosharp</td><td>BS-XG-03L</td><td>Pipette di liquidi e disturbo fisico del tessuto pancreatico</td></tr><tr><td>Tubo centrifuga da 50 mL</td><td>Beijing Labgic Technology Co., Ltd.</td><td>CT-002-50A</td><td>Tenere le soluzioni durante l'esperimento, contenere tessuti e centrifugare</td></tr><tr><td>Vasi di coltura cellulare da 60 mm</td><td>Beijing Labgic Technology Co., Ltd.</td><td>12211</td><td>Contenitore per contenere un mezzo di coltura contenente isolotti per una facile raccolta</td></tr><tr><td>Soluzione di etanolo al 75%</td><td>HYNAUT</td><td>N/A</td><td>Immergi i topi per la disinfezione.</td></tr><tr><td>Adobe Photoshop 2023</td><td>Adobe Inc.</td><td>N/A</td><td>Genera immagini.</td></tr><tr><td>Centrifuga Beckman Allegra X-12/X-12R</td><td>BECKMAN</td><td>Allegra X-12/X-12R</td><td>Centrifuga</td></tr><tr><td>Albumina sierica bovina (BSA)-V</td><td>Solarbio</td><td>A8020</td><td>Mantieni la normale funzione fisiologica degli isolotti e usa (it/this) per preparare soluzioni di glucosio a diverse concentrazioni.</td></tr><tr><td>Mouse C57BL/6J, grado SPF, 6 e linea; 8 settimane, peso 18 e linea; 25 g</td><td>Centro degli Animali da Laboratorio dell'Università Medica Navale &nbsp;</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Kit per il test di viabilità e citotossicità delle cellule di calceina/PI</td><td>Beyotime</td><td>C2015L</td><td>Rilevare la vitalità cellulare e la citotossicità delle cellule animali basandosi sulla colorazione a doppia fluorescenza di cellule vitali e morte con Calcein-AM (Calcein AM) e Propidium ioduro (PI) simultaneamente.</td></tr><tr><td>Cloruro di calcio (anidro)</td><td>Sangon Biotech</td><td>10043-52-4</td><td>Prepara la soluzione di collagenasi P</td></tr><tr><td>Filtro cellulare (100 e mu; m)</td><td>Biosharp</td><td>BS-100-XBS</td><td>Filtraggio delle cellule acinar</td></tr><tr><td>Collagenasi P</td><td>Sigma</td><td>11213857001</td><td>Digestione del tessuto pancreatico</td></tr><tr><td>Soluzione D-(+)-Glucosio (20%, sterile)</td><td>Beyotime</td><td>ST491</td><td>Stimola la secrezione di insulina dagli isolotti.</td></tr><tr><td>DMEM base (1x) (Dulbecco' s Eagle Medium modificato)</td><td>Gibco</td><td>C11995500BT</td><td>Coltivazione delle cellule acinar</td></tr><tr><td>Siero fetale bovino (FBS)</td><td>Biowest</td><td>S140B-500</td><td>Prepara il mezzo di coltura</td></tr><tr><td>Soluzione sterile PREMIUM Ficoll-Paque</td><td>Cytiva</td><td>17544203</td><td>Mezzo del gradiente di densità per la stratificazione del gradiente di densità</td></tr><tr><td>GraphPad Prism 8.0.1</td><td>GraphPad Software, LLC</td><td>N/A</td><td>Generare immagini ed eseguire analisi statistiche.</td></tr><tr><td>Soluzione HEPES (1 M)</td><td>Biosharp</td><td>BL1061A</td><td>Prepara la soluzione di collagenasi P</td></tr><tr><td>Centrifuga ad alta velocità/refrigerata</td><td>Sigma</td><td>3K15</td><td>Centrifuga</td></tr><tr><td>ImageJ</td><td>Laboratorio Nazionale di Salute per la Strumentazione Ottica e Computazionale (LOCI)</td><td>N/A</td><td>Analizza le immagini di fluorescenza cellulare e calcola la vitalità cellulare.</td></tr><tr><td>Microscopio biologico invertito</td><td>Leica</td><td>N/A</td><td>Osserva la morfologia cellulare e seleziona gli isolotti.</td></tr><tr><td>Microscopio a fluorescenza invertita</td><td>OLYMPUS</td><td>IX73</td><td>Osserva i segnali fluorescenti cellulari e cattura immagini fluorescenti.</td></tr><tr><td>Buffer bicarbonato di Krebs-Ringer HEPES</td><td>LEAGENE</td><td>CZ0103</td><td>Mantieni la normale funzione fisiologica degli isolotti e usa (it/this) per preparare soluzioni di glucosio a diverse concentrazioni.</td></tr><tr><td>Kit ELISA INS (Insulina) del Topo</td><td>Wuhan Fine Biotech Co., Ltd.</td><td>EM0260</td><td>Rileva il livello di secrezione di insulina negli isolotti.</td></tr><tr><td>Pinza oftalmica (10 cm, curva con uncino)</td><td>Dispositivi Medici Qingyi</td><td>N/A</td><td>Assisti nella dissezione</td></tr><tr><td>Pinza oftalmica (10 cm, dritta con il dente)</td><td>Dispositivi Medici Qingyi</td><td>N/A</td><td>Assistere nella dissezione, nella separazione improvvisa del tessuto pancreatico e nell'estrazione del tessuto pancreatico</td></tr><tr><td>Soluzione di estreptomicina con penicillina</td><td>Gibco</td><td>15140-122</td><td>Prepara il mezzo di coltura per prevenire la contaminazione</td></tr><tr><td>RPMI-1640 medio,</td><td>KeyGEN BioTECH</td><td>KGL1501-500</td><td>Interrompi la soluzione digestiva P della collagenasi e coltiva gli isolotti</td></tr><tr><td>Inibitore della tripsina da Glycine max (soia)</td><td>Sigma</td><td>T6522</td><td>Prepara la soluzione di collagenasi P</td></tr><tr><td>Forbici chirurgiche (10 cm, dritta)</td><td>Dispositivi Medici Qingyi</td><td>N/A</td><td>Assistenza anatomica e taglio del tessuto pancreatico in piccoli pezzi</td></tr><tr><td>Bagno d'acqua</td><td>OAICLAB</td><td>OW-HF</td><td>Mantieni la temperatura di digestione.</td></tr><tr><td>Kit per il saggio sull'attività di &alpha;-amilasi e &beta;-amilasi</td><td>Elabscience</td><td>E-BC-K006-M</td><td>Rilevare i livelli di amilasi secreta dalle cellule acinar in condizioni diverse</td></tr></tbody></table>

un metodo semplice e rapido per l'isolamento simultaneo degli isolotti primari e delle cellule acinari pancreatiche primarie da topi

A Simple and Rapid Method for Simultaneous Isolation of Primary Islets and Primary Pancreatic Acinar Cells from Mice

Un metodo semplice e rapido per l'isolamento simultaneo degli isolotti primari e delle cellule acinari pancreatiche primarie da topi

In the research on the pathogenesis of post-acute pancreatitis diabetes mellitus (PPDM-A), abnormal bidirectional communication between pancreatic acinar ...

a-simple-rapid-method-for-simultaneous-isolation-primary-islets

Research

JoVE Journal

Medicine

Una descrizione dettagliata di isolamento del mouse isolotto è descritta utilizzando la tecnica di incannulazione in situ duttale pancreatico e perfusione di una combinazione di purificato collagenasi e proteasi neutra.

Mouse Isolotto di Langerhans isolamento utilizzando una combinazione di Collagenasi depurato e proteasi neutra

Questo video descrive la tecnica utilizzata per isolare le cellule acinose pancreatiche - cellule esocrine - contenenti una varietà di enzimi digestivi. Le cellule acinose primarie sono utili nello studio ex vivo della metaplasia acino-duttale (ADM), un evento precoce nello sviluppo del cancro al pancreas.

Isolamento primario delle cellule acinose: un metodo per isolare le cellule acinose dal pancreas di topo

Le isole pancreatiche, chiamate anche isole di Langerhans, sono un gruppo di cellule endocrine che producono ormoni per la regolazione del glucosio e altre importanti funzioni biologiche. Questo protocollo spiega un metodo per isolare le isole pancreatiche mediante prima perfusione di collagenasi tramite l'ampolla di Vater per digerire il tessuto pancreatico esocrino e una centrifugazione semplificata in gradiente di densità per purificare le isole dai topi.

Isolamento delle isole pancreatiche attraverso la perfusione di collagenasi: un metodo enzimatico per isolare le cellule delle isole pancreatiche

Saggio funzione in vitro β-cellulare utilizzando isolate del mouse isole di Langerhans è una componente importante nello studio della fisiopatologia del diabete e terapeutica. Mentre molte applicazioni a valle sono disponibili, questo protocollo descrive specificamente la misurazione di intracellulare adenosina monofosfato ciclico (cAMP) come parametro essenziale determinare la funzione β-cellulare.

Un metodo per l&#39;isolamento del mouse isole pancreatiche e intracellulare cAMP Determinazione

In questa pubblicazione, si descrive una procedura rapida e conveniente per l'isolamento e la coltura primaria cellule pancreatiche acinose del pancreas murino. Questo metodo costituisce un valido approccio per studiare la fisiologia delle cellule esocrine del pancreas freschi primarie normali / non trasformata.

Isolamento e Cultura del mouse principale acinose pancreatiche Cellule

Presentiamo qui un protocollo per l'isolamento delle isole dal modello murino di diabete di tipo 2, Leprdb e i dettagli di un test su cellule vive per la misurazione della secrezione di insulina da isole intatte che utilizza la microscopia a 2 fotoni.

LEPR<sup&gt; Db</sup&gt; Mouse Modello di diabete di tipo 2: pancreas isolamento Islet e live-cella 2-Photon Imaging di isolotti Intact

Descriviamo qui un protocollo per isolare isolotti intatti da topi neonati. Pancreas sono stati parzialmente digerito con collagenasi, seguita da lavaggio e raccolta manuale. 20 - 80 clusters insule possono essere ottenuti per pancreas da topi appena nati, che sono adatti per diversi studi insulari.

Efficace isolamento di isole funzionali da neonatali mouse Pancreas

Questo protocollo di isolamento dell'isolotto ha descritto una nuova via di iniezione di collagenasi per digerire il tessuto esocrino e una procedura di gradiente semplificata per purificare le isole dai topi. Si tratta di digestione ezimatica, separazione/purificazione del gradiente e raccolta a mano dell'isolotto. Il successo dell'isolamento può produrre 250-350 isolotti di alta qualità e completamente funzionali per mouse.

Un semplice protocollo ad alta efficienza per l'isolamento delle isolozioni pancreatiche dai topi

Qui presentiamo un protocollo per isolare le cellule delle isole pancreatiche del mouse per lo screening di induzioni ROS dai xenobiotici al fine di identificare i potenziali prodotti chimici xenobiotici diabetogeni.

Uno Screening basati su cellule dell'isolotto pancreatico murino per prodotti chimici ambientali diabetogeni

Qui presentiamo un protocollo per l'imaging e la quantificazione della dinamica del calcio in popolazioni cellulari eterogenee, come le cellule delle isolotiche pancreatiche. I reporter fluorescenti vengono consegnati nello strato periferico delle cellule all'interno dell'isolotto, che viene poi immobilizzato e immagine, e viene eseguita l'analisi per cellula della dinamica dell'intensità della fluorescenza.

Imaging calcio Dynamics in sottopopolazioni di cellule di islet pancreatica del topo

Questo protocollo descrive un metodo standardizzato per il prelievo chirurgico, la digestione enzimatica e la purificazione con gradiente di densità degli isolotti pancreatici del ratto Lewis, consentendo preparazioni ad alta resa e alta purezza per l'uso diretto in studi di trapianto o in vitro .

Isolamento e purificazione degli isoli pancreatici da ratti Lewis tramite digestione enzimatica e separazione tra densità e gradiente

Scopri un metodo semplice per isolare contemporaneamente isole e cellule acinari pancreatiche primarie da topi. Questa tecnica facilita lo studio della comunicazione intercellulare nella patogenesi del diabete.

Un metodo semplice e rapido per lisolamento simultaneo degli isolotti primari e delle cellule acinari pancreatiche primarie da topi (Video) | JoVE Journal

Un metodo semplice e rapido per l'isolamento simultaneo degli isolotti primari e delle cellule acinari pancreatiche primarie da topi

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